標(biāo)準(zhǔn)型基質(zhì)膠-不含酚紅

貨號(hào)：MG2237、MG4237、MG6237

存儲(chǔ)條件：-80℃ 保存，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)，含有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長(zhǎng)因子。

基底膠在室溫條件下，聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，以及對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)的研究。基質(zhì)膠也適用于類(lèi)器官生長(zhǎng)、分化、代謝和毒理學(xué)研究。高濃度的基質(zhì)膠可以用于動(dòng)物體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞包被。

操作方法：

一、薄膠成膠方法：

1. 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為 50μL/cm² 生長(zhǎng)面積的基質(zhì)膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘，即可使用。

二、厚膠成膠方法：

1. 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細(xì)胞與基質(zhì)膠混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中。加入濃度為 150-200μL/cm

2 生長(zhǎng)面積的基質(zhì)膠。

3. 在 37℃放置 30 分鐘，可成膠。可以加入細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)，也可使細(xì)胞直接生長(zhǎng)在膠表面。

三、薄層包被方法：

1. 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻基質(zhì)膠成勻漿狀。

2. 根據(jù)使用需要，采用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要確定最佳包被濃度。

3. 將稀釋的 基質(zhì)膠包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個(gè)器皿的生長(zhǎng)表面。室溫下孵育 1 小時(shí)。

4. 去除未結(jié)合的基質(zhì)膠，用無(wú)血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。

四、類(lèi)器官培養(yǎng)方法：

1. 用適量的4℃過(guò)夜解凍的基質(zhì)膠重懸細(xì)胞或組織沉淀，推薦重懸密度為每50μL基質(zhì)膠懸液包含1X10^5細(xì)胞，重懸后可置于冰上，重懸時(shí)間不超過(guò)30s以避免基質(zhì)膠過(guò)早凝固。基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過(guò)程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

2. 將基質(zhì)膠和組織細(xì)胞的混合懸液點(diǎn)入預(yù)熱的24孔板底部正中央，每孔30μL左右，避免懸液接觸孔板側(cè)壁。為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。

3. 將接種完成后的培養(yǎng)板至于 37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育 15min 左右待基質(zhì)膠凝固。

4. 待基質(zhì)膠wanquan凝固后，沿壁緩慢加入類(lèi)器官培養(yǎng)基，24孔板每孔 500uL，避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。

5. 將24孔板置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6. 每 3 天更換一次培養(yǎng)基，更換培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)避免破壞基質(zhì)膠。

五、胚胎干細(xì)胞 ES 和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 ips 培養(yǎng)（推薦使用hES驗(yàn)證款基質(zhì)膠）

1. 在冰上解融一份分裝的基質(zhì)膠。

2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預(yù)冷的DMEM/F-12，并且放在冰上。

3. 將解融的基質(zhì)膠按一定稀釋比例（如1:100）加入到預(yù)冷的 DMEM/F-12中（在50 mL離心管中），混勻。

4. 稀釋好的基質(zhì)膠溶液必須立即使用，進(jìn)行培養(yǎng)皿的包被。推薦的包被體積參見(jiàn)下表。

5. 輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿，將基質(zhì)膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面。

注意：如果培養(yǎng)皿的表面沒(méi)有被基質(zhì)膠溶液wanquan覆蓋，則不能用于人ES和iPS細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個(gè)小時(shí)，不可使基質(zhì)膠蒸發(fā)。

注意：如果不是立即使用，包被好的培養(yǎng)皿必須密封防止基質(zhì)膠溶液的蒸發(fā)，包被后可以在2 - 8°C放置一周。在使用之前，至少在室溫（15 - 25°C）中放置30分鐘恢復(fù)到室溫。

7. 輕輕的將培養(yǎng)皿的一側(cè)傾斜，使多余的基質(zhì)膠溶液在一側(cè)的邊緣匯聚。通過(guò)移液器或者泵吸取多余的基質(zhì)膠溶液。確保包被的表面沒(méi)有被刮到。

8. 立即加入ES細(xì)胞培養(yǎng)基（例如，6孔板每孔2 mL）。

注意事項(xiàng)：

1. 收到產(chǎn)品并確認(rèn)到貨情況無(wú)異常后，請(qǐng)將 基質(zhì)膠儲(chǔ)存于--80℃冰箱，短暫使用可置于--20℃冰箱。切勿將基質(zhì)膠儲(chǔ)存于自動(dòng)除霜的冰箱中。在第一次融化后請(qǐng)分裝保存，應(yīng)避免基質(zhì)膠反復(fù)凍融。

2. 因基質(zhì)膠在 10℃以上即可成膠，在操作過(guò)程中，保持基質(zhì)膠一直置于冰上，所有接觸的細(xì)胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭，分裝管等都必須預(yù)冷后使用。

3. 所有操作均需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

4. 溶解時(shí)可將基質(zhì)膠基質(zhì)置于 4℃冰箱內(nèi)冰上過(guò)夜溶解。成膠后基質(zhì)膠可以在 4℃ 24－48 小時(shí)后重新呈液態(tài)。