DAB顯色試劑盒

產(chǎn)品組成

保存條件：A組分 -20℃，B、C組分4℃避光密閉保存，一年有效。避免反復(fù)凍融。

DAB顯色試劑盒

產(chǎn)品簡介：

DAB辣根過氧化物酶顯色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一種依據(jù)辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合顯色,用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或 Western(Southern、Northern、EMSA 等膜顯色的試劑盒。DAB即 3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride，是辣根過氧化物酶的常用底物，在辣根過氧化物酶的催化下DAB會產(chǎn)生棕色沉淀，該棕色沉淀不溶于水和乙醇，因此在DAB顯色后,還可以使用溶于乙醇的染料進(jìn)行后續(xù)染色。

Lablead DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時(shí)結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測以及細(xì)胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。本試劑僅用于科研領(lǐng)域。

自備材料:

1、洗滌液2、蒸餾水

操作步驟(僅供參考)∶

1、常規(guī)組織切片、細(xì)胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育，用適當(dāng)洗滌液洗滌3~5次，每次3~5min ;對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后也可用洗滌液洗滌3~5次，每次3~5min。

2、按DAB顯色液∶DAB buffer︰DAB氧化劑=5000∶5000∶3的比例混合，即為DAB顯色工作液，即配即用。

3、洗滌組織，去除洗滌液，加入適量DAB顯色工作液，確保覆蓋樣品。

4、室溫避光孵育30min 或更長時(shí)間，直至顯色至預(yù)期深淺。

5、去除DAB顯色工作液，用蒸餾水清洗1~2次即可終止顯色反應(yīng)。

6、對組織切片或細(xì)胞樣品，反應(yīng)終止后，如有必要可用中性紅染色，便于觀察；對于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

注意事項(xiàng)︰

1、本試劑盒給予的DAB氧化劑多于實(shí)際使用量，請按比例使用。

2、DAB氧化劑易揮發(fā)，請注意密閉保存，以免效率下降，一旦開封請盡快使用。

3、DAB氧化劑有腐蝕性，請勿直接接觸于人皮膚、毛發(fā)等。

4、試劑(A)、試劑(B避免反復(fù)凍融，以免顯色效率下降。

5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

常見問題及可能原因︰

1、背景顯色太深

①在免疫組化時(shí)如果背景顯色太深，考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進(jìn)行封閉;也應(yīng)注意選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

②在進(jìn)行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時(shí)，如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶，可以在4倍體積甲醇中加入1倍體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。

③可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗?jié)舛取?/p>

④選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液，或延長洗滌時(shí)間。

2、沒有顯色或顯色太弱

①適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度﹔檢測二抗效果，滴1滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生wu素檢測體系。

③適當(dāng)延長顯色時(shí)間，另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。