貨號(hào)：MG2255

儲(chǔ)存：-80℃ 保存，避免反復(fù)凍融。保質(zhì)期2年

1. 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)，含有豐富的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長(zhǎng)因子。

基底膠在室溫條件下，聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，以及對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)的研究。基質(zhì)膠也適用于類器官生長(zhǎng)、分化、代謝和毒理學(xué)研究。高濃度的基質(zhì)膠可以用于動(dòng)物體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞包被。

本款基質(zhì)膠針對(duì)類器官培養(yǎng)進(jìn)行了特別優(yōu)化，在總蛋白濃度不變的條件下，調(diào)整了層粘連蛋白和部分生長(zhǎng)因子等組分的比例，提升了培養(yǎng)類器官的成功率和穩(wěn)定性。         

2. 操作方法

2.1類器官培養(yǎng)方法

1. 用適量的4℃過(guò)夜解凍的基質(zhì)膠重懸細(xì)胞或組織沉淀，推薦重懸密度為每 50μL基質(zhì)膠懸液包含 1X10⁵細(xì)胞，重懸后可置于冰上，重懸時(shí)間不超過(guò) 30s 以避免基質(zhì)膠過(guò)早凝固。基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在 70%以上以保證培養(yǎng)過(guò)程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

2. 將基質(zhì)膠和組織細(xì)胞的混合懸液點(diǎn)入預(yù)熱的24 孔板底部正中央，每孔 30μL 左右，避免懸液接觸孔板側(cè)壁。為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。

3. 將接種完成后的培養(yǎng)板至于 37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育 15min 左右待基質(zhì)膠凝固。

4. 待基質(zhì)膠wan全凝固后，沿壁緩慢加入類器官培養(yǎng)基，24 孔板每孔 500uL，避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。

5.將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6.每 3 天更換一次培養(yǎng)基，更換培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)避免破壞基質(zhì)膠。

2.2 胚胎干細(xì)胞 ES 和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 ips cell培養(yǎng)

1. 在冰上解融一份分裝的基質(zhì)膠。

2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預(yù)冷的DMEM/F-12，并且放在冰上。

3. 將解融的基質(zhì)膠按一定比例（如1:100）加入到預(yù)冷的 DMEM/F-12中（在50 mL離心管中），混勻。

4. 稀釋好的基質(zhì)膠溶液必須立即使用，進(jìn)行培養(yǎng)皿的包被。推薦的包被體積參見(jiàn)下表。

5. 輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿，將基質(zhì)膠溶液均勻的覆蓋到培養(yǎng)皿的表面。

注意：如果培養(yǎng)皿的表面沒(méi)有被基質(zhì)膠溶液wan全覆蓋，則不能用于人ES和iPS細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 培養(yǎng)皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個(gè)小時(shí)，不可使基質(zhì)膠蒸發(fā)。

注意事項(xiàng)：

1.收到產(chǎn)品并確認(rèn)到貨情況無(wú)異常后，請(qǐng)將基質(zhì)膠儲(chǔ)存于--80℃冰箱，短暫使用可置于-20℃冰箱。切勿將基質(zhì)膠儲(chǔ)存于自動(dòng)除霜的冰箱中。在第一次融化后請(qǐng)分裝保存，應(yīng)避免基質(zhì)膠反復(fù)凍融。

2.因基質(zhì)膠在 10℃以上即可成膠，在操作過(guò)程中，保持基質(zhì)膠一直置于冰上，所有接觸的細(xì)胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭，分裝管等都必須預(yù)冷后使用。

3.所有操作均需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

4.溶解時(shí)可將基質(zhì)膠基質(zhì)置于 4℃冰箱內(nèi)冰上過(guò)夜溶解。成膠后基質(zhì)膠可以在 4℃ 24－48 小時(shí)后重新呈液態(tài)。